分光光度法目前只能測有顏色或具有吸光度的水質樣品。如果所分析水樣沒有顏色或者吸光值非常小，那就需要水質分析人員在被測樣品中加入能與被測物質生成穩定，且具有顏色物質的反應試劑。而這個過程被稱為顯色反應，這種試劑被稱之為顯色劑。另外顯色反應在分析時與顯色劑有關，而且與顯色的條件有關。

在水質分析時選擇顯色反應條件，主要目的是為了讓待測成分在選擇的反應條件下，能有效地轉變為適于光度分析的化合物。為了提高分析的靈敏度和準確度，必須選擇合適的顯色劑用量、溶液酸度、顯色時間和溫度等。

分光光度法的顯色反應條件

1、顯色劑的用量

在顯色反應中一般都加入適當過量的顯色劑，以使被測物質盡可能轉化為有色化合物，但并非顯色劑加得越多越好，顯色劑過多，則會發生其他副反應，對水質的分析不利。在實際工作中應該根據實驗要求常嚴格控制顯色劑的用量。

2、顯色溶液的酸度

有機顯色劑大部分是有機弱酸，溶液的酸度影響顯色劑的濃度以及本身的顏色。由于大部分金屬離子容易水解，酸度也會影響金屬離子的存在狀態，進一步還會影響有色化合物的組成和穩定性。因此，應通過試驗確定出適當的酸度范圍，并在水質分析過程中嚴格控制。

3、顯色反應時間

有些顯色反應能夠迅速完成且顏色穩定；有些顯色反應速率較慢，需放置一段時間，顏色才能穩定。因此，應該在顯色反應完成后，顏色達到最大深度(即吸光度最大)且穩定的時間范圍內進行分析。

4、顯色溫度

一般情況下，顯色反應多在室溫下進行，但有些顯色反應需加熱到一定溫度才能完成。因此，不同的顯色反應應選擇適宜的顯色溫度，并應注意控制溫度。

5、溶劑

溶劑的不同可能會影響顯色時間、有色化合物的離解度和顏色等。在分析時標準溶液和被測溶液應采用同一種溶劑。